【問題】求關於RNAi的資料


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近年來的研究發現,一些短片段的雙鏈RNA能夠使特定的mRNA降解,藉此阻斷此基因的表現,此一作用機制稱為 RNA 干擾現象 (RNA Interference, 簡稱 RNAi)。siRNA (Small Interfering RNA) 就是這種短片段雙鏈RNA分子,能夠以與序列同源互補的 mRNA為標靶,降解特定的mRNA。

目前市面上研究 RNA 干擾現象的方法很多,大列可以區分成二大類: 第一種為 In vitro 合成 siRNA,在將 siRNA 送入細胞中達到 Gene Silencing 的作用,另一種方法為 送入帶有 RNA Polymerase III Promoter 的序列至細胞中,於細胞內進行大量表現 siRNA。

我們將一一介紹每種方法的特色以及其優缺點,在 Rev. 4-1將首先介紹給大家知道的是本公司所代理的 pSUPER RNAi System。

pSUPER RNAi System 介紹:

由Oligoengine所提供的 pSUPER RNAi System 是針對人類細胞設計用來表現siRNA的載體,pSUPER RNAi System 使用 H1 RNA polymerase III promoter 可以有效的在哺乳動物細胞中形成hairpin siRNA,抑制target gene的表現可以長達數個月。

pSUPER RNAi System 提供二種適用於哺乳動物細胞篩選用的抗生素篩選基因,分別為 Neomycin Resistance Gene & Puromycin Resistance Gene,並且利用 PGK (phosphoglycerate kinase) Promoter 進行表現 Neomycine/Puromycine Resistance Gene,並且於fusion protein downstream有SV40 polyadenylation signal , 使所表現的fusion protein於哺乳動物細胞中更加穩定。

由 pSUPER RNAi System 衍生改良的 pSUPERIOR RNAi System,pSUPERIOR RNAi System 為 Tetracyclin (Tet) Regulated Expression Vectors,此調控系統衍生於 E.coli Tn10-encoded Tetracycline (Tet) Resistance Operon,可以利用Tetracyclin調控 siRNA的表現。

pSUPER RNAi System 的優點:

1. 在細胞內可以表現大量且穩定的siRNA

2. 可以持續表現siRNA長達數星期

3. 提供 pSUPERIOR RNAi Inducible System,可以持續表現siRNA長達數個月

4. 提供 Neo/EGFP Fusion Protein,方便進行篩選

pSUPER RNAi System 的缺點:

1. 操作較繁瑣 , 需先進行tempalte synthesis , ligation , transformation ,

plasmid purification , sequencing , transfcetion

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